Самые читаемые

Экспресс-диагностика африканской чумы свиней иммунохроматографическим методом

Известно, что, согласно стандартам Всемирной организации здравоохранения животных (OIE), диагностические исследования на Африканскую чуму свиней (АЧС) должны быть направлены как на идентификацию возбудителя (выделение вируса, выявление вирусного антигена, выделение и детекция геномной ДНК), так и на выявление вирус специфических антител.

При выборе тестов следует учитывать эпидемиологическую ситуацию в конкретном регионе, форму протекания болезни и возможную вирулентность возбудителя. В нашей стране на сегодняшний день для выделения и детекции геномной ДНК вируса широко используются соответствующие тест-системы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР), в т.ч. в режиме «реального времени» (РВ-ПЦР) производства ГНУ ВНИИВВиМ (г. Покров), ООО «Ветбиохим» (г. Москва), ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора (г. Москва). Ряд иммунологических тестов применяется как для обнаружения вируса в культуре клеток и срезах тканей, так и для выявления антител в сыворотке крови и суспензии селезенки. К первым относят реакцию гемадсорбции (РГАд) и реакцию прямой иммунофлюоресценции (РПИФ), ко вторым – иммуноферментный анализ (ИФА), метод непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) и иммуноблоттинг (ИБ). Все вышеперечисленные методы стали практически рутинными в лабораторной диагностике АЧС.

В 2013 году в АНО «НИИ ДПБ» была завершена разработка первой отечественной иммунохроматографической тест-системы (ИХТС) предназначенной для выявления вируса АЧС в биологическом материале инфицированных животных. Ранее с использованием двух моноклональных антител (МкА) к белку vp73 вируса АЧС была разработана и испытана тест-система в формате «сэндвич»-ИФА, предназначенная для выявления антигена вируса АЧС, с чувствительностью 5 - 10 нг/мл белка². Следующим этапом стало производство ИФА-набора («АЧС-ИФА», ООО «Ветбиохим»), который в настоящее время используется в ветеринарных лабораториях нашей страны для проведения диагностических исследований на АЧС. «Сэндвич»-ИФА и явился прототипом ИХТС, поскольку иммунологические принципы и основные специфические компоненты одинаковы для обоих методов (иммунохроматографический метод относится к одному из вариантов гомогенного ИФА и основан на латеральной диффузии реагентов по мембранному пористому носителю).

Для разработки ИХТС в качестве специфических компонентов были использованы МкА к белку vp73 вируса АЧС (№1 и №2) и МкА к IgG мыши (№3). МкА №1 в виде конъюгата коллоидного золота адсорбированы на подложке (подушке) нитроцеллюлозной мембраны и предназначены для связывания с вирусом испытуемой пробы в зоне «нанесения образца» и формирования иммунного комплекса. МкА №2 адсорбированы в «тестовой» зоне (Т) иммунострипа и предназначены для фиксации мигрирующего за счет латеральной диффузии этого иммунного комплекса.

В «контрольной» зоне (С) стрипа адсорбированы МкА №3 для фиксации несвязавшихся с вирусом МкА №1 и предназначены для контроля эффективности иммунологической реакции на стрипе. Результатом реакции является наличие или отсутствие горизонтальных окрашеных полос в зонах «Т» и «С». Наличие полос в обеих зонах является положительным результатом теста (испытуемая проба содержит вирус АЧС), наличие полосы только в зоне «С» – отрицательным (рис. 1).

Рис. 1. Результаты оценки эффективности двух серий ИХТС (синие и желтые пластиковые кассеты соответственно) по выявлению вируса АЧС в биологическом материале. Левые стрипы – положительная реакция, правые – отрицательная.

Оценку практической эффективности ИХТС по выявлению вируса АЧС проводили в нескольких регионах России и Республике Абхазия в лабораторных условиях с использованием проб биологического материала, взятого как от инфицированных, так и от здоровых животных (n=97, таблица 1).

Таблица 1– Результаты ИХТС по выявлению вируса АЧС в практических условиях.

п/п

Учреждение,


где проводились испытания

Испытуемые пробы биоматериала и их количество

Результат испытания

1

ФГБУ «ВНИИЗЖ»

Положительные пробы (10% суспензия паренхиматозных органов) от экспериментально зараженных вирусом АЧС животных и животных из вспышек заболевания (Тверь, Воронеж), культуральная жидкость, сыворотка крови. Контрольные пробы: материал от незараженных животных. n=25.

20 положительных проб;

5 отрицательных

2

Волгоградская областная ветеринарная лаборатория

кровь, селезенка, костный мозг, лимфоузлы, легкое, почка. n=48.

37 положительных проб

11 отрицательных

3

ФГБУ «Тверская МВЛ»

селезенка диких кабанов. n=9.

4 положительные пробы;

5 отрицательные

4

Республика Абхазия

пробы паренхиматозных органов от туш свиней на районных рынках. n=15.

все пробы отрицательные

 

Параллельно все испытуемые пробы (за исключением Республики Абхазия) были исследованы методами ПЦР и РПИФ. Было установлено, что результаты ИХТС и ПЦР совпали в 100% случаев при исследовании цельной крови, сыворотки крови, селезенки и печени, т.е. при исследовании биоматериала с максимально высоким содержанием вируса. После проведения испытаний был сделан основной вывод о том, что ИХТС обладает высокой чувствительностью и специфичностью, прост в постановке, удобен в использовании и применим в практических условиях для проведения скрининговых исследований на АЧС домашних свиней и диких кабанов.

Таким образом, ИХТС может служить одним из средств ранней диагностики болезни и контроля за распространением вируса АЧС на территории нашей страны.

О.А.Верховский, доктор биологических наук, профессор
АНО «Научно-исследовательский институт диагностики
и профилактики болезней человека и животных»,
г. Москва, Россия

Вакансии для подведомственных управлению ветеринарии Воронежской области учреждений на сентябрь 2017 г.

1. БУВО «Аннинская райСББЖ»:

- ветеринарный врач – 4 ед.;

- ветеринарный фельдшер;

- инженер – электроник;

- специалист по охране труда.

2. БУВО «Бобровская райСББЖ»:

- ветеринарный врач.

3. БУВО «Борисоглебская райСББЖ»:

- ветеринарный фельдшер.

4. БУВО «Верхнехавская райСББЖ»:

- ветеринарный врач – 2 ед.;

- ветеринарный санитар – 2 ед.;

- водитель – 2 ед.

5. БУВО «Ворбьевская райСББЖ»:

- ветеринарный врач – 2 ед.;

- ветеринарный санитар – 5 ед.;

- инженер – электроник;

- ветеринарный фельдшер – 2 ед.;

- специалист по охране труда;

- завхоз;

- водитель – 3 ед.

6. БУВО «Грибановская райСББЖ»:

- заведующий ветеринарного участка;

- специалист по охране труда.

7. БУВО «Каменская райСББЖ»:

- ветеринарный врач;

- заведующий ветеринарного участка.

8. БУВО «Каширская райСББЖ»:

- инженер – электроник;

- специалист по охране труда;

- водитель – 4 ед;

- ветеринарный санитар.

9. БУВО «Нижнедевицкая райСББЖ»:

- ветеринарный врач;

- ветеринарный фельдшер.

10. БУВО «Новоусманская райСББЖ»:

- ветеринарный санитар;

- специалист по охране труда;

- инженер – электроник;

- водитель.

11. БУВО «Павловская райСББЖ»:

- ветеринарный фельдшер – 3 ед.;

- бухгалтер;

- ветеринарный врач;

- ветеринарный санитар – 3 ед.

12. БУВО «Панинская райСББЖ»:

- ветеринарный санитар – 3 ед.;

- водитель – 5 ед.;

- ветеринарный врач;

- кассир.

13. БУВО «Петропавловская райСББЖ»:

- ветеринарный врач;

- ветеринарный санитар – 2 ед.;

- водитель – 3 ед.

14. БУВО «Рамонская райСББЖ»:

- водитель – 3 ед.

15. БУВО «Россошанская райСББЖ»:

- ведущий ветеринарный врач;

- ветеринарный фельдшер;

- водитель.

16. БУВО «Таловская райСББЖ»:

- ветеринарный фельдшер;

- водитель.

17. БУВО «Хохольская райСББЖ»:

- ветеринарный врач;

- ветеринарный фельдшер;

- водитель.

18. БУВО «Эртильская райСББЖ»:

- заведующий ветеринарного участка;

- ведущий ветеринарный врач (временная, отпуск по беременности и родам);

- ветеринарный врач (временная, отпуск по беременности и родам);

- ветеринарный врач;

- ветеринарный санитар;

- специалист по охране труда;

- специалист электроник;

- водитель – 3 ед.

19. БУВО «Воронежская облветстанция»:

- ветеринарный врач.

Яндекс.Метрика